瑪莉歐兄弟本來是默默無名的水電工，有一次他們在修理布魯克林的地下水管時，不小心來到異世界的蘑菇王國，而弟弟路易吉則是掉到黑暗王國，馬利歐為了找回弟弟，不得不向蘑菇王國的公主求助，公主答應他的請求，條件是他必須學會玩通關遊戲，剛開始瑪麗歐吃了不少苦頭，但終於他差點就贏了。
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公主對他說：「自己不是這裡的人，是在我還懵懵懂懂的時候，就不小心來到這裡，他們接納我，還讓我做他們的公主。其實你已經很不錯了。」
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「你這是在安慰我嗎？妳剛開始也常出錯吧？」
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「我從小在這裡長大，大概做了好幾百次吧？」
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公主帶他來到森林王國請求剛族借兵，但條件是必須打敗國王的兒子奇力剛，剛開始瑪莉歐處於下風，是公主好心提醒，他才有辦法找到讓自己變強的蘑菇，他頓時變成了貓，別且打贏奇力剛，國王只好答應借兵給他們。當他們開車來到彩虹大橋的時候，黑暗王國的追兵竟然來偷襲，好不容易甩掉他們後，不要臉的庫巴竟然來向公主求婚。
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奇力剛跟馬利歐被鰻魚吃掉後，是他們趁鰻魚打哈欠的時候，狡猾的帶著賽車零件離開。他們衝到婚禮現場救出所有被庫巴抓到的大家，包括瑪莉歐的弟弟路易吉。在大家反抗的時候，瑪莉歐竟然不小心回到自己的世界，而庫巴也追來這裡，但在大家的幫助下，瑪莉歐兄弟拿到超級星，並且打敗庫巴，公主用縮小蘑菇將他變小，關進籠子裏，從此庫巴不敢到處作威作福了。
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